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流動(dòng)相使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-08-24      點(diǎn)擊次數(shù):1428
1.流動(dòng)相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過(guò)濾、脫氣,清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi),為了防止雜物(固體)進(jìn)入流路,裝有吸濾器,但網(wǎng)孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過(guò),這會(huì)導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此,建議常用0.45μm濾膜過(guò)濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣,如不脫氣,在溶劑混合時(shí),或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡,會(huì)導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢,檢測(cè)器產(chǎn)生噪聲信號(hào)等。

  2.流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí),流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前,基線水平很難穩(wěn)定,特別是發(fā)生漂移,也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí),混合液變化大,往往會(huì)與室溫相差很大,務(wù)必注意。

  3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應(yīng)用HPLC級(jí)的、水應(yīng)用二次蒸餾水,水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換,防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水(炊用)并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí),水中的不純物會(huì)成為鬼峰,從而干擾分析結(jié)果。

  4.流動(dòng)相的pH值過(guò)高或過(guò)低,流動(dòng)相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對(duì)試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞,這種對(duì)色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的

  5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí),在使用前和使用后都要用水清洗流路,絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

  6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相,使用前請(qǐng)過(guò)濾。并且使用該含鹽流動(dòng)相前,色譜柱需先用低比例有機(jī)相(有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%)的溶液沖洗,以免緩沖鹽析出。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液,建議現(xiàn)用現(xiàn)配,以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

  7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過(guò)程中流動(dòng)相的互溶性,避免因流動(dòng)相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問(wèn)題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí),用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲(chǔ)存流動(dòng)相后在接柱子。

  8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí),中間要用異丙醇溶液清洗過(guò)渡。例如:先用甲醇水做流動(dòng)相,然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí),一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水,然后用正己烷沖洗異丙醇,反之也是一樣。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。

  9.儀器在短期(兩三天)不用時(shí),流路中可以是甲醇或水。儀器在長(zhǎng)期不用時(shí),流路中應(yīng)用甲醇。

  10.對(duì)于UV等檢測(cè)器用于高靈敏度檢測(cè)時(shí),要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑,如甲醇、乙腈等。

  11.當(dāng)流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí),流速為1ml/min泵的正常壓力5~7Mpa之間,如果壓力逐漸降低,基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大,導(dǎo)致泵的流速降低??蛇m當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。

  12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯,乙酸、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑,會(huì)對(duì)流路中的PEEK樹(shù)脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹(shù)脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑,如KCI、NaCI、NH4CI等。對(duì)流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用,以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí),分析完了后,應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

  13.用于檢定梯度等性能時(shí),短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒(méi)有問(wèn)題的。

  14.注意:稀硝酸與甲醇不能混合,否則有可能會(huì)引起爆炸。

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