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固相萃取裝置原理

更新時間:2018-03-13      點擊次數(shù):2720
  1.選擇SPE 小柱或濾膜 首先應(yīng)根據(jù)待測物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì), 選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
 
  2.活化 萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5~ 10ml 溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水
 
  溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易
 
  被水潤濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前, 應(yīng)使SPE 填料保持濕潤, 如果填料干燥會降低樣品保留值; 而各小柱的干燥程度不一, 則會影響回收率的重現(xiàn)性。
 
  3.上樣 一般可采取以下措施: (1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃??;(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃??;(3) 用酸或無機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取;(4) 超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高, 加樣前先用水或緩沖液稀釋, 必要時可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合, 然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
 
  4.淋洗 反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml。
 
  5.洗脫待測物 應(yīng)選用5~10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。
 
  在過去的二十多年中,固相萃取作為化學分離和純化的一個強有力工具出現(xiàn)了。從痕量樣品的前處理到工業(yè)規(guī)模的化學分離,吸附劑萃取在制藥、精細化工、生物醫(yī)學、食品分析、有機合成、環(huán)境和其他領(lǐng)域起著越來越重要的作用。
 
  固相萃取是一個包括液相和固相的物理萃取過程。在固相萃取中,固相對分離物的吸附力比溶解分離物的溶劑更大。當樣品溶液通過吸附劑床時,分離物濃縮在其表面,其他樣品成分通過吸附劑床;通過只吸附分離物而不吸附其他樣品成分的吸附劑,可以得到高純度和濃縮的分離物。
 
  保留和洗脫
 
  在固相萃取中zui通常的方法是將固體吸附劑裝在一個針筒狀柱子里,使樣品溶液通過吸附劑床,樣品中的化合物或通過吸附劑或保留在吸附劑上(依靠吸附劑對溶劑的相對吸附)。“保留”是一種存在于吸附劑和分離物分子間吸引的現(xiàn)象,造成當樣品溶液通過吸附劑床時,分離物在吸附劑上不移動。保留是三個因素的作用:分離物、溶劑和吸附劑。所以,一個給定的分離物的保留行為在不同溶劑和吸附劑存在下是變化的。“洗脫”是一種保留在吸附劑上的分離物從吸附劑上去除的過程,這通過加入一種對分離物的吸引比吸附劑更強的溶劑來完成。
 
  容量和選擇性
 
  吸附劑的容量是在*條件下,單位吸附劑的量能夠保留一個強保留分離物的總量。不同鍵合硅膠吸附劑的容量變化范圍很大。選擇性是吸附劑區(qū)別分離物和其他樣品基質(zhì)化合物的能力,也就是說,保留分離物去除其他樣品化合物。一個高選擇性吸附劑是從樣品基質(zhì)中僅保留分離物的吸附劑。吸附劑選擇性是三個參數(shù)的作用:分離物的化學結(jié)構(gòu)、吸附劑的性質(zhì)和樣品基質(zhì)的組成。

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